Matilde: Una bellissima giovane donna che è l'oggetto del desiderio di Ambrosio. Alla fine viene uccisa da Ambrosio dopo averlo rifiutato.
Agnese: Una giovane suora allieva di Ambrosio. Viene sedotta da Ambrosio e rimane incinta. Alla fine muore di parto.
Don Raimondo: L'abate del monastero dove vive Ambrosio. È un uomo saggio e giusto che cerca di aiutare Ambrosio a superare le sue tentazioni.
Donna Elvira: Una donna ricca e potente che diventa l'amante di Ambrosio. Alla fine lo tradisce e lo consegna all'Inquisizione.
L'Inquisitore: Un uomo potente e spietato che presiede il processo di Ambrosio e alla fine lo condanna a morte.