Inizialmente, Topolino era caratterizzato dalla sua figura semplice e arrotondata e dagli occhi grandi. Iwerks ha apportato un notevole perfezionamento al design di Topolino, introducendo sottili cambiamenti che hanno migliorato la sua personalità ed espressività. Ha accentuato le orecchie di Topolino e ha aggiunto cerchi neri ai suoi occhi, conferendo al personaggio un aspetto più distintivo e accattivante.
Iwerks ha avuto un ruolo fondamentale anche nello sviluppo delle prime animazioni di Topolino. È stato pioniere di tecniche innovative come l'animazione "dritto" e "da posa a posa", che hanno consentito una maggiore fluidità di movimento e una rappresentazione più dinamica del personaggio. I suoi contributi rivoluzionari hanno contribuito a rendere Topolino un'icona amata e un fenomeno culturale mondiale.