Buono contro il male: Il romanzo esplora il tema classico del bene contro il male, rappresentato da Sherlock Holmes e il Mastino. Holmes incarna il potere della ragione e della deduzione, mentre il Mastino simboleggia le forze dell'oscurità e della superstizione.
La condizione umana: Il romanzo approfondisce anche la condizione umana, in particolare i temi della paura, della colpa e della redenzione. Sir Henry Baskerville è perseguitato dalla maledizione della sua famiglia, mentre il dottor Mortimer è alle prese con il senso di colpa per la morte di Sir Charles Baskerville. Holmes, tuttavia, rappresenta il trionfo dell'intelletto umano sulla superstizione e sulla paura.