Personaggi principali:
* Sherlock Holmes: Il brillante detective, rinomato per il suo ragionamento deduttivo e le sue capacità di osservazione.
*Dott. John H. Watson: Amico fedele e cronista di Holmes, che spesso funge da punto di vista del lettore.
* Maria Morstan: Una giovane donna cerca informazioni sulla scomparsa di suo padre e sul misterioso "Segno dei Quattro" che riceve.
* Jonathan Piccolo: La mente malvagia, ma in definitiva tragica, dietro il furto del tesoro di Agra e del "Segno dei Quattro".
* Taddeo Sholto: Ex compagno di crimine di Jonathan Small, che eredita una parte del tesoro di Agra. Viene assassinato prima che la storia abbia inizio.
* Athelney Jones: Un detective di Scotland Yard, spesso ridicolizzato da Holmes per il suo approccio eccessivamente metodico e poco intuitivo.
Altri caratteri importanti:
*Sig. Hudson: La padrona di casa del 221B di Baker Street, dove risiedono Holmes e Watson.
* La tribù Tonga: Un gruppo di nativi delle Isole Andamane, fedeli a Jonathan Small e utilizzati per portare a termine i suoi piani.
* Il "Segno dei Quattro": Nome dato a quattro oggetti unici:una spilla d'argento, una piccola scatola decorata, un pezzo di tubo di piombo e un collare per cani. Questi oggetti sono associati al furto del tesoro di Agra.
Personaggi secondari:
* Bartolomeo Sholto: Il fratello di Thaddeus, che eredita una parte del tesoro di Agra e diventa un bersaglio per Jonathan Small.
*Sig. Sholto: La madre di Taddeo e Bartolomeo, preoccupata per la loro incolumità.
*Signorina. Morstan (madre di Maria): Una donna che una volta era innamorata di Thaddeus Sholto e che morì in circostanze misteriose.
* Ispettore Bradstreet: Un ispettore di Scotland Yard che lavora con Athelney Jones.
È importante ricordare che mentre la storia si concentra principalmente sui personaggi principali, molti personaggi secondari aggiungono strati alla trama e contribuiscono all'atmosfera generale del romanzo.