Un gel di poliacrilammide è preparato con fessure in esso . Il gel è formato versando una soluzione di poliacrilammide liquido caldo in una scatola poco profonda . La scatola dovrebbe contenere una struttura simili a pettini con denti che puntano verso il basso nella soluzione . La poliacrilammide diventa un gel subito dopo che è stato versato e il pettine viene rimosso per rivelare fori rettangolari .
Sodio dodecil solfato ( SDS )
La proteina è trattata con sodio dodecil solfato ( SDS ) per denaturare le subunità di una proteina grande così ognuno può essere misurato separatamente . I vantaggi di questo sono che la SDS dà i polipeptidi una carica negativa in modo che migrano verso il polo negativo , o anodo , del gel . In secondo luogo , la SDS si assicura che tutte le subunità avranno la stessa carica e, pertanto, saranno tutti migrare nel gel in base alle loro masse molecolari invece di accuse .
Aggiunta di proteine
una piccola quantità di DNA o proteina è collocato in uno dei fori rettangolari ad una estremità del gel . Una corrente elettrica viene fatto passare attraverso il gel a pH neutro . Circa 10 microlitri di una scala di DNA e due controlli vengono caricati nel gel . La scaletta del DNA viene utilizzato per consentire di misura di quanto il campione si trasferì nel processo di elettroforesi .
Elettroforesi
La macchina poi acceso a 100 volt e lasciare correre per 30 minuti . Dopo che i campioni sono stati sottoposti ad elettroforesi per 30 minuti , il gel con un vassoio viene rimosso e collocato in un vassoio di colorazione per circa tre minuti . Questo è seguito posizionando il gel in acqua calda per cinque minuti . Il gel è ora pronto per essere immessi sul light box per osservare il movimento dei frammenti di DNA .
Altre considerazioni
Quando si visualizza il gel sotto la luce , alcune cose importanti devono essere prese in considerazione . Una cellula può essere eterozigote o omozigote per il gene seconda che la copia è presente o non presente in entrambe le copie o in uno solo. Il risultato eterozigote può apparire come un unico gruppo , perché i segmenti di DNA che vengono amplificate in modo più efficiente appaiono più scure nel gel . Un colorante viene aggiunto anche in modo che ogni polipeptide può essere visto sia durante che dopo l'elettroforesi .