- La moglie di Horatio Caine, Marina, interpretata da Sofia Milos: Marina Caim era la moglie di Horatio durante le prime stagioni dello spettacolo. Originariamente era un'investigatrice privata che aiutava Horatio in alcuni casi. Tuttavia, il loro matrimonio alla fine andò in pezzi a causa della dedizione di Orazio al suo lavoro.
- Calleigh Duquesne, interpretato da Emily Procter: Calleigh Duquesne è una CSI di livello 3 e la figlia di un agente di polizia di Miami. È un'esperta scienziata forense ed è nota per la sua esperienza nell'analisi del DNA e nell'identificazione delle armi da fuoco.
- Natalia Boa Vista, interpretata da Eva LaRue: Natalia Boa Vista si unisce alla squadra nella quinta stagione come CSI di livello 2. È un'ex agente di polizia sotto copertura e ha un background in psicologia, che la aiuta a comprendere le motivazioni dei criminali.
- La moglie di Delko, Marisol Delko, interpretata da Elizabeth Berkley Lauren: Marisol Delko è la moglie di Eric Delko. Si sposano nel finale della quarta stagione. Marisol lavora anche come detective della omicidi a Miami.
- Yelina Salas, interpretata da Sofia Vassilieva: Yelina Salas si unisce alla squadra nella stagione 9. È la figlia di un mafioso russo e conosce il funzionamento interno delle organizzazioni criminali.